穿越火线配置

 聯系我們

論文發表網站 羅編輯 174797907 論文代發平臺 尹編輯 174797907 投稿郵箱:[email protected]
聯系電話:18685220838
社內電話:0851-88507641
 

農業論文

穿越火线配置>冬蟲草子實體菌種提純復壯技術研究

穿越火线枪战王者天赋怎么加:冬蟲草子實體菌種提純復壯技術研究

發布時間:2014-07-08 點擊: 發布:論文代發-經典期刊網-論文發表
發布時間:2013-08-20 點擊:197  字體:大 中 小 打印
摘要從野生冬蟲草菌株中獲取菌種,經人工馴化栽培,冬蟲草(子實體)在生產實踐中普遍出現傳種幾代后菌種嚴重退化的現象,通過菌種提純復壯前后菌絲生長情況和子實體栽培情況的對比,結果證明不斷對菌種進行提純復壯,使菌種保持原有品種的遺傳物質,恢復原來的生活力和優良種性,對防止菌種過早退化、保障子實體優質高產有一定的作用。 
  關鍵詞冬蟲草子實體;人工栽培;提純復壯 
   2003年開始,梅州農業學校進行“冬蟲草(子實體)人工栽培技術研究”課題研究并獲得成功,2004年通過梅州市穿越火线配置局組織的成果鑒定,并獲2005年度梅州市科技進步三等獎。現在校內建立了規?;?,取得了較好的經濟效益和社會效益,但在生產過程中,遇到了一個普遍性的難題,就是容易出現菌種老化或衰退,造成產量和質量不穩定[1-4]。為了降低這種因菌種退化而帶來的風險,筆者在菌種提純復壯技術上進行了研究,現將結果總結如下。
  1材料與方法 
  1.1試驗材料 
  1.1.1菌種。經栽培試驗不斷去劣擇優以獲得優良菌株。優良菌株的形態特征:菌絲生長快、潔白致密,后期轉淺黃色,見光后易轉桔黃色;在栽培中,選擇原基分化早且整齊,子實體生長快、粗壯、抗雜菌能力強、耐高溫、孢子多且呈桔黃色的作為優良菌株,同時作為待復壯的菌株。 
  1.1.2培養基配制。培養基中土豆200 g(煮汁)、蔗糖20 g、磷酸二氫鉀1 g、硫酸鎂1 g、蛋白胨1 g、瓊脂20 g,加水定溶至1 000 mL,經高壓滅菌30 min。在24~25 ℃環境下制成斜面培養基。 
  1.2試驗設計 
  試驗設4個處理,分別為:孢子分離培養(A);蟲體回接法分離培養(B);組織分離法培養(C);未經復壯作為對照(CK)。 
  1.3試驗實施 
  1.3.1無菌處理。所選待復壯優良菌株子實體,在無菌條件下經75%酒精和0.1%升汞溶液進行分離處理;分離所使用的工具要經過濕熱滅菌、酒精擦抹、火焰灼燒等多種表面殺菌處理后,才可直接接觸培養基、組織塊。在21~25 ℃環境下靜態培養,待菌絲布滿斜面,再經考種,反復篩選,得到提純復壯后的優良菌株。 
  1.3.2菌種分離培養。按試驗設計采用以下3種分離方法:①孢子分離法。選取待復壯菌株的子實體,用0.1%升汞溶液,或75%酒精進行表面消毒后,用無菌水清洗表面藥液,置于盛有綜合培養基容器上方懸空,在21~23 ℃下靜置培養,待培養基表面出現星芒狀蟲草菌落時[5-6],在接種箱內挑取單個或多個菌落置試管斜面培養基上培養。待蛹蟲草菌絲布滿斜面可得到菌種A。②蟲體回接法。將蛹蟲草通過活的蛹體進行復壯,將所選優良菌株的分生孢子,挑取一部分放在無菌水內制成孢子懸濁液,再選取發育時期的健康蠶蛹作宿主,用75%乙醇消毒,用接種針針尖蘸孢子懸濁液刺入蛹體,感染成功率可在95%以上,將染菌后的蛹體平攤于蠶匾或竹席上,24~25 ℃室溫下?;ぶ劣繼褰┯?。取長滿菌絲的體內組織粒到斜面培養基上,在24~25 ℃條件下繼續培養到菌絲布滿斜面,可得到優良菌種B。③組織分離法。在優良菌株中選取無雜菌的長度2~4 cm狀態好的的子實體,用無菌水沖洗,刮掉表層,取肉質大小為1 mm于斜面培養基上,培養基斜面上應無游離冷凝水,以防細菌感染擴散,致使分離失敗。在24~25 ℃培養15 d,菌絲布滿斜面,得到菌種C。 
  1.3.3菌種的去污提純。無論采用上述哪種菌種分離法,培養初期必須判斷菌絲是否已受雜菌污染。分離培養后,若發現被有色的霉菌小斑點污染,最好放棄。如由同一材料分離得來的,每支試管都是如此,那就要重新分離。若污染點遠離接種點,多是無菌操作中感染雜菌所致,可用前端菌絲切割法或基內菌絲挑取法轉管提純。嚴格地說,在斜面培養基上的非接種部位若見白色菌絲,則應認為是雜菌菌落,就應立即提純,采用切割法或基內菌絲挑取法提純后,一般都能獲得較好的純菌絲。 
  1.3.4考種。將經過不斷提純復壯后的3種菌種(處理A、處理B、處理C),分別置米飯培養基上,于18~23 ℃下培養20~30 d,觀察生長情況。若見有細菌或霉菌污染,應進一步純化;若無雜菌污染,子實體生長正常,說明菌種可靠,可繼續擴大培養。 
  2結果與分析 
  由表1可知,經提純復壯后的菌種處理A、處理B、處理C菌絲日平均生長量分別為5.75、6.12、5.15 mm,與未經復壯處理CK的菌種菌絲日平均生長量4.12 mm相比都有所提高,且子實體長勢比較均勻、個數多;子實體栽培試驗中復壯的菌種與未復壯處理的菌種子實體轉色情況觀察比較:處理B轉色最快,處理C、處理A次之,未經復壯處理的CK轉色最慢;從出草所需天數來看經復壯的菌種處理A、處理B、處理C出草天數分別為14、10、12 d,而未經復壯處理的CK出草天數為18 d,所需出草天數也縮短了;從產量上看,所采子實體重量也明顯提高,從14.8 g/瓶分別提升到21.3、23.5、20.2 g/瓶。 
 ?。ㄏ倫?56頁) 
  3結論與討論 
  試驗結果表明,提純復壯的技術方法可以獲得比較純的優質菌種。但是蟲草菌種要求的外界條件相當嚴格,受外界因素影響明顯,如生產中菌種的移接代數、有效的菌種保藏方法、菌種生長營養條件和外界環境等,僅以常規提純復壯的方法,還不能真正解決菌種衰退的問題。目前,有研究發現組織細胞產后的脫氫酶與細胞活力成正比,因此也可以通過脫氫酶的測定來提早淘汰退化菌株,以減少損失。 
  4參考文獻 
  [1] 李亞潔,王鶴,孟楠,等.蛹蟲草菌種復壯技術的研究[J].食用菌,2006,28(2):18-19. 
  [2] 康業斌,陳建偉.蟲草屬真菌無性型的培養鑒定技術研究[J].中國食用菌,1995,14(6)7-8. 
  [3] 趙仁發,黃森倫,劉暢慶.冬蟲草(子實體)優質高產栽培技術研究[J].江西農業學報,2007,19(8):113-114. 
  [4] 王家斌.雙孢蘑菇多孢子分離試驗[J].食用菌,2005,27(2):16. 
  [5] 劉淑琴,宮文超,李春燕.TTC法細胞酶活力測試技術在北蟲草選育中應用[J].食用菌,2005,27(2):12-13. 
  [6] 黃毅.食用菌栽培[M].北京:高等穿越火线配置出版社,2009.
投稿郵箱:[email protected]